Hoe te identificeren Gram positieve Rods
Sinds de jaren 1880 , de gramkleuring proef blijft een belangrijke methode van bacteriële identificatie en classificatie . Microbiologen voeren vaak Gram test de eerste stap in het identificeren bepaalde soorten staafvormige bacteriën van het genus Bacillus . Gram kleuring is genoemd naar zijn uitvinder , de Deense bacterioloog Hans Christian Gram . De techniek werkt vanwege een verschil in gram positieve en gram negatieve bacteriële celwand fysiologie . Bepaalde gram-positieve staven veroorzaken ernstige ziekten zoals miltvuur en tetanus.Things je nodig hebt
Lab kleren
Handschoenen
schoeisel te bedekken
Snelkookpan
Bacteriën kolonie
Agar
Petri gerechten
Water
Entogen
glasplaatje
Methanol
bunsenbrander
Kristalviolet vlek
Jodium vlek reagens
Decolorizer
Safranine
Fuchsin oplossing
absorberend papier
Microscoop
Toon meer instructies
1
Beveilig het gebruik van een schone , aseptische laboratorium ruimte om de gramkleuring test uit te voeren . Draag schone lab kleding en schoeisel te bedekken, om besmetting te voorkomen . Gebruik handschoenen en een masker bij het hanteren van bacterieculturen . Isoleer een kolonie van bacillen op je test en groeien op voedselrijke agar in petrischalen . Steriliseer de petrischaaltjes en agar met een snelkookpan voor gebruik. Kopen van 2
Voeg een paar druppels van schoon water aan de cultuur schotel. Verdeel het gelijkmatig over de agar . Sleep een inenting lus licht over het oppervlak van de agar 's . Breng het monster op een schoon glasplaatje en smeer het gelijkmatig in cirkelvormige gebied ter grootte van een dubbeltje . Houd de omvang van de steekproef minimaal ; je nauwelijks in staat om het te zien met het blote oog zou moeten zijn .
Breng 3 95 procent methanol over de glijbaan uitstrijkje gedurende twee minuten om de cellen te repareren en verstoring van hun morfologie te voorkomen . Lucht drogen de dia of verwarm het zachtjes op een laag bunsenbrander vlam. Verplaats de schuif heen-en- weer om gelijkmatig te verwarmen en te voorkomen dat gelokaliseerde hot spots . Breng de warmte gelijkmatig en constant . Vermijd het nemen van de slide out van de vlam tot je klaar bent het te verhitten .
4
Giet crystal violet vlek reagens over het vaste glijbaan . Laat het staan voor 30 tot 60 seconden . Was de vlek met kraanwater voor een paar seconden. Afvoer overtollig water uit de dia. Bedek de dia met jodiumkleur reagens gedurende 30 tot 60 seconden . Afwassen de jood met kraanwater . Kantel de glijbaan en voeg een paar druppels ontkleuringsmiddel . Breng het tot de afvoer schoon is. Was de glijbaan .
5
Week de dia met roze -gekleurde safranineoplossing contra - kleuring reagens voor 30 seconden . U kunt eenvoudig fuchsine oplossing te wisselen voor de safranineoplossing . Voorzichtig wassen de glijbaan en schudden van overtollig water . Dep het droog met absorberend papier en vervolgens aan de lucht drogen de dia. Onderzoek de bereide dia onder een microscoop uitgerust met een lichtbron . Opzoeken en terugvinden van gram-positieve bacteriën staven met blauwe of violette kleur van de gramkleuring test.
->:
<-: