Hoe DNA extraheren uit bladeren

Plant organische stof uit vele cellen , die elk bevatten DNA dat de instructies voor de groei en functie heeft . Wetenschappers kunnen wensen om een deel of het geheel van het genetisch materiaal in de cellen te bestuderen , en moeten dus veilig pak het DNA van de structurele materiaal en mobiele machines die it.Things omringt je nodig hebt Pagina 2 gram bladeren
vijzel
Centrifuge
waterbadbedwelming
Balance
Kaasdoek
Zes 15ml Centrifugeerbuizen Plaat van een 1,5 ml Eppendorf buis
100ml CTAB- extractiebuffer
2ml Beta - mercaptoethanol
7ml 24 : 1 chloroform : isoamylalcohol mengsel
50 microliter RNAse a in een concentratie van 10 mg /ml
Pipetten
6 ml isopropanol
2 ml 70 % ethanol
1 ml steriel gedeïoniseerd water
Heb Toon Meer Instructions
1

Vul het waterbad tot het aanbevolen niveau met water , die varieert met de specificaties van elke fabrikant , en zet hem aan . Stel het waterbad tot 65 ° C en laat het komen tot temperatuur . Plaats de isopropanol container op het ijs . Stel de centrifuge bij 3000 omwentelingen per minuut bij een temperatuur van 20 graden Celsius . Kopen van 2

Weeg 2 g bladeren op een balans en plaats ze in een mortier. Voeg genoeg beta - mercaptoethanol via pipet een container extractiebuffer zodat het eindproduct bestaat uit 1-2 procent van beta - mercaptoethanol . Bijvoorbeeld , als u een volume van buffer die meet ongeveer 100 ml , voeg vervolgens 2 ml beta -mercapto-ethanol aan de container en meng.
3

Pipette 7 ml extractie buffer in de mortel . Plet het mengsel in een homogene vloeistof met de stamper .
4

Vouw een stuk kaasdoek meer dan vier lagen vormen. Zeef en knijp de vloeistof door de lagen in een 15 ml centrifugebuis.
5

Plaats de buis in het waterbad voor 30to 60 min Utes . Zwenk de buis om de inhoud te mengen elk kwartier . Laat de buis afkoelen tot kamertemperatuur na volledige tijdsperiode op .
6

Vul de buis met chloroform en isoamylalcohol mengsel ( deze bevat 24 delen chloroform enerzijds isoamylalcohol ) , zodat de buisje bevat de helft van het monster en de halve nieuwe vloeistof toevoeging . Sluit het buisje en draai hem ondersteboven een paar keer langzaam, zodat de vloeibare mengsels .
7

Zet de buis in de centrifuge en laat het draaien voor 10 minuten .
8

Place 50 ml RNAse a in een nieuwe centrifugebuis . Pipetteer het supernatant ( de heldere laag aan de bovenkant van de buis boven een witte laag van materiaal) in de eerste buis uit en verplaatsen naar de tweede buis . Sluit het buisje en keer het een paar keer om de inhoud te mengen . Houd de tube bij kamertemperatuur gedurende een uur .
9

Voer de stappen 6 en 7 weer twee keer , zodat u een duidelijk voorbeeld buis. Pipet vervolgens aan 9 ml van de heldere vloeistof uit de laatste buis in een nieuwe buis . Voeg 6 ml isopropanol en draai de buizen 10 keer op een zachte manier , zodat het DNA valt uit de oplossing en in een vaste vorm . Centrifugeer de buis gedurende 10 minuten, wat een pellet van DNA moeten creëren in de bodem van de buis .
10

Giet de vloeistof in de buis zodat de pellet blijft . Pipetteer in 2 ml 70 % ethanol en opnieuw plaats in de centrifuge gedurende vijf minuten . Giet het vloeibare deel weer . Gebruik een steriele pipet te halen de pellet en verplaats het naar een steriele 1,5 ml Eppendorf buis. Pipetteer in 200 microliter steriel gedeïoniseerd water en laat de DNA oplossen volledig in de vloeistof die gedurende de nacht kan nemen . De steekproef is dan klaar voor analyse .