Hoe een primerdimeer oplossen

De polymerase kettingreactie , of PCR , een techniek die in moleculaire biologie gebruikt om specifieke gebieden van DNA te amplificeren . PCR is afhankelijk van primers die korte DNA-strengen die complementair zijn en specifiek zijn voor het DNA van belang zijn . Terwijl primers algemeen zal binden aan DNA overeenkomt met hun volgorde, ze af en toe zal binden aan en versterken elkaar , waardoor het fenomeen dat bekend staat als een primer dimer.Things je nodig hebt
Primersequenties
Toon Meer Instructions

1

Onderzoek het GC -gehalte ( het aantal G's en C's ) in uw primersequentie . GC binding is sterker dan AT binding door de extra waterstofbinding tussen guanine en cytosine . Optimale hechting is ten minste 50 procent GC inhoud. Kopen van 2

Onderzoek de annealing temperatuur van uw reactie. Low annealing temperaturen , meestal verstaan ​​55 C of lager , kan niet-specifieke binding veroorzaken van de primer , die primer dimeren kan bovendien leiden tot amplificatie van genomisch foutieve secties .
3

Double -Controleer de hoeveelheid en concentratie van primers u toegevoegd aan de PCR . Een overmaat aan primers , over het algemeen meer dan 75 picomol kan veroorzaken primer dimeren , als goed.