Hoe maak je een hangende druppel Bereid

Om de 3D-structuur van een eiwit te bepalen , moet je eerst een zuivere kristal van. De hangende - druppel -methode maakt gebruik van een druppel - eiwit bevattende oplossing opknoping van een dekglaasje . Daaronder opknoping daling ligt een reservoir met een hogere zoutconcentratie dan die van de druppel . Na verloop van tijd , waterdamp verlaat de onderstaande en eindigt in het reservoir , waardoor het eiwit kristalliseren . Elk eiwit vereist andere voorwaarden ( zoals zoutconcentratie en pH ) , en vaak vallen en opstaan ​​is de enige manier om de juiste conditions.Things vindt U zult
Lab jas , handschoenen en een beschermingsmiddel voor de ogen
Micropipet met pipet nodig tips
1 molair oplossing van natriumchloride in 0,05 molair acetaatbuffer , pH 4,7 Pagina 2 ml Eppendorf buizen ( of soortgelijke )
Centrifuge
24 -well plaat
vacuüm vet in spuit
gesiliconiseerde dekglaasje
Perslucht
pincet
Clay (bijvoorbeeld klei of iets dergelijks)
50 mg /ml lysozym in 0,05 molair acetaatbufferoplossing , pH 4,7
Toon Meer Instructions

1

Trek lab spullen ( jas , handschoenen en een beschermingsmiddel voor de ogen ) . kopen van 2

Gebruik een micropipet tot 1,1 ml toe van een natriumchloride ( zout) en acetaatbufferoplossing in een Eppendorf buis.
3

Centrifugeer de gesloten Eppendorf buis met de zoutoplossing in het voor ongeveer vijf minuten bij 13.000 tpm . Vergeet niet de centrifuge evenwicht door het plaatsen van een Eppendorf buis met 1,1 ml water tegenover en tegenover de zoutoplossing tube .
4

Voeg 1 ml van de zoutoplossing een putje in een 24 -well plaat.
5

Gebruik een - vet spuit een dun laagje vet te plaatsen langs de rand van dit goed . Zorg te weinig of te veel te voegen . Als je te veel vet toe te voegen , zal het vet naar beneden in de put lopen en eventueel ruïneren uw experiment . Als u te weinig gebruikt, zal het ook niet worden luchtdicht en het experiment zal niet werken . Doel voor net genoeg vet dat het dekglaasje en vet vormen een luchtdichte afsluiting later.
6

Rol de klei met je handen tot vier kleine balletjes maken , en duw ze op de vier hoeken van de 24 wells plaat . Zij zullen fungeren als ondersteuning om ervoor te zorgen de cover van de plaat niet in aanraking met het dekglaasje komen .
7

Gebruik perslucht om stof af te blazen van het dekglaasje . Houd het dekglaasje met een paar schone pincet .
8

Zuig 4 microliter van de lysozym oplossing met de micropipet en voeg deze oplossing toe aan het centrum van het dekglaasje . Veranderen pipet tips , en voeg 4 microliter van de zoutoplossing . Voorzichtig pipet op en neer , zuigen fluïdum verdrijven dan het, om de zoutoplossing met de lysozym oplossing te mengen . Zorg ervoor dat de twee te mengen zonder het verspreiden van de vloeistof over het dekglaasje .
9

Draai het dekglaasje snel voorbij , zodat de vloeistof niet glijden , en planten het vierkant boven op de put. Zorg ervoor om voorzichtig op zodat het een luchtdichte afdichting met het vet rondom de randen van het goed vormt .
10

Schuif de cover van de 24 - wells plaat op de klei ballen , en laat de plaat op een koele plaats .