Hoe niet - specifieke binding te verminderen Containers
In een Immunoassay de bindingscapaciteit in een container of in microtiterplaat putjes hoger is dan de hoeveelheid eiwit geplaatst in de container of boorputten . Om antilichamen of andere eiwitten en moleculen absorberen naar de container of boorputten verminderen of te voorkomen , moet de test worden gewassen met geschikte buffer en een specifiek blokkerend reagens worden toegevoegd . Het type buffer en het blokkeren van reagens gekozen , hangt af van de aard van de experimentele assay.Things je nodig hebt
putjes
Buffer oplossing
blokkeren van reagens
Pipette
Antigeen
Antibody
Toon MoreInstructions
1
Coat de putjes met het antigeen . Gebruik een antigeen verdunning . Zuivere oplossingen van antigeen niet nodig omdat slechts ongeveer 3 procent van het eiwit in het monster het doeleiwit . Bij verdunning , zodat de monsters bevatten het antigeen bij een concentratie die binnen het detectiebereik van het antilichaam . Pipetteer de antigeen verdunningsoplossing beneden de putjes . Sommige platen kunnen vooraf bekleed met antigeen . Lees de instructies die bij de plaat putten geleverd . Kopen van 2
Bedek de platen met een zelfklevende plastic en incubeer overnacht . Was de platen met bufferoplossingen , zoals Tris - gebufferde zoutoplossing of fosfaatgebufferde zoutoplossing . Te wassen, spoel de platen met behulp van een squeeze fles gevuld met de bufferoplossing over een laboratorium gootsteen . Aai de platen met een papieren handdoek om resterende druppels bufferoplossing verwijderd .
Verminderen 3 de niet - specifieke binding van eiwitten en moleculen met een blokkerende buffer of reagens , zoals een detergens blocker , droge melk of bovine serum . Het type blokkerende reagens zal afhangen van de test . Voeg de blokkering reagens aan de putjes met een pipet . Bedek de plaat opnieuw met plakplastic en incubeer overnacht .
4
opnieuw wassen van de putjes opnieuw met een bufferoplossing . Deze stappen zullen de hoeveelheid niet - specifieke binding die kan optreden bij de putjes verminderen vóór het toevoegen van de nodige antilichaamoplossing voor de procedure . Daarnaast kan de blokkerende reagentia helpen verminderen achtergrondkleuren in de resultaten van de testen .
->:
<-: