Droogmethoden Protocol voor PVDF

Wanneer bindend nucleïnezuren of eiwitten , een high - bindende materiaal genaamd PVDF ( polyvinyldifluoride ) membraan biedt ondersteuning voor de antilichamen . Via Western blotting , worden de membranen elkaar gestapeld , voorbereid voor het antilichaam en vervolgens gedroogd . Protocol voor het drogen van het membraan vereist kennis van hoe membranen werken , kathodeplaten , anodeplaten en toepassing van methanol oplossingen . Met het juiste protocol , het membraan veilig bindt met het specifieke antilichaam en is direct klaar voor gebruik of opslag. Voorbereiden van de Membrane

Voorbereiden van de PVDF-membraan reinigt en stabiliseert het membraan vóór de overdracht . Vóór het drogen wordt het membraan " geblokkeerde " binding van iets anders dan de specifieke nucleïnezuren , zoals niet-specifieke antilichamen voorkomen . Tijdens deze procedure u het membraan nat door het leggen van het op een plat oppervlak bedekt met methanol . Het membraan verandert van kleur tijdens deze zin , van dekkend tot halfdoorzichtige . Eenmaal klaar met de methanol bad, is het membraan geplaatst in gedemineraliseerd water te weken gedurende ongeveer twee minuten . Het membraan moet dan weer weken in een methanol oplossing die zeer zuur .
Vergadering van Membranen Voordat Transfer

Twee van de membraan papieren zijn gedrenkt in de eerste methanol oplossing en geplaatst op een anode plaat . Tijdens dit proces moet u zorgvuldig controleren op luchtbellen , waarin de overdracht in gevaar kunnen brengen . Een ander stuk filterpapier gedrenkt in de tweede methanoloplossing en bovenop de stapel . Een gel gaat dan boven op het membraan , met zorg niet bekneld luchtbellen tussen het aanbrengen van de gel en membraan. Drie nieuwe stukken papier worden vervolgens gedrenkt in een buffer en kathode bovenop de gel . Eventuele luchtbelletjes zich voordoet , een reageerbuis werkt te glad uit de membranen.

Transfer

In dit deel van het proces , je hoogspannings- verbinding koorden op een voeding en toepassen van een constante stroom aan de gel gebied op het membraan gedurende 30 minuten . Overdracht tijden zullen variëren afhankelijk van het type antilichaam . Na 30 minuten , de voeding en de overdracht membraan te verwijderen . De rechter benedenhoek van het membraan wordt vervolgens gesneden om oriëntatie te controleren. De eerste twee lagen van het filterpapier worden verwijderd , inclusief de gel . De banden van het molecuulgewicht zijn gemarkeerd met een balpen .
Drogen

Zodra de overdracht is voltooid , kunt u het membraan drogen in een van twee manieren . Voor sneller drogen , wordt het membraan geweekt in 100 procent methanol gedurende 10 seconden om het water te verwijderen . Het membraan rust dan op een stuk papier handdoek voor 15 minuten . Voor een langzamer drogende werkwijze wordt het membraan op de papieren handdoek geplaatst zonder toevoeging van methanol. Eenmaal gedroogd , kan het membraan worden gebruikt of opgeslagen in een droge fles bij 4 graden Celsius voor toekomstig gebruik .