Hoe gelfiltratiekolommen kalibreren

gelfiltratiekolommen worden gebruikt om eiwitten te scheiden van complexe mengsels . Aangezien elk eiwit een unieke molecuulgewicht , kunnen ze worden geïnduceerd scheiden in afzonderlijke lagen migreren door ze door een filtratie kolom met gelijkmatige gelmatrix . Aan elk eiwit dat afgescheiden correct te identificeren , moet u de kolommen kalibreren met verschillende eiwitten van bekende moleculaire weight.Things Je
Koolzuuranhydrase
cytochroom C
Aprotinine
Basale zout nodig
Centrifugeerbuizen
Ferritin
Centrifuge
Pipet pomp
250 ml maatcilinder
Buffer vloeistof
Wetenschappelijke schoonmaakdoekjes
Spuit vat
Toon meer instructies

1

Verwijder de flesjes van koolzuuranhydrase , cytochroom C en aprotinine uit de koelkast of de vriezer en laat ze op kamertemperatuur komen . Voeg 4 mg van elk eiwit een centrifugebuis per milliliter gel in de kolom filtratie . Voeg 961 mcl van basale zout per milligram eiwit aan elke centrifugebuis om de eiwitten te ontbinden . Voeg 39.2 mcl van ferritine per milliliter gel aan elke buis en meng in een centrifuge . Kopen van 2

Zet de filtratiekolom pomp en sluit de kraan bij de ingang kolom. Schroef , maar verwijder deze niet , de top van de kolom filtratie. Zet de pomp aan het maximale debiet voor de kolom en start de pomp totdat de buffer materiaal is afgetapt . Stop de pomp .
3

Voeg 1 ml van elk eiwit aan de kolom filtratie met behulp van een pipet pomp . Druppel de eiwitten langs de binnenkant van de kolom van een hoogte van 1 cm tot 2 cm , die rond de binnenrand van de kolom . Laat het eiwit mengsel om zich te vestigen op de top van de gel matrix .

Plaats
4 de uitlaat slang van de pomp in een schone , droge 250 ml maatcilinder . Start de pomp met een snelheid van 0,30 ml per minuut en laat de eiwitten in de gel matrix. Terwijl de pomp draait , spoel de zijkanten van de buis met de pipet pomp en een kleine hoeveelheid buffervloeistof . Zodra de eiwitten volledig zijn ingevoerd de gel matrix , vermindering van de snelheid van de pomp tot 0,02 ml per minuut en pomp in een 5 cm tot 7 cm dikke laag buffer vloeistof bovenop de matrix .
5

Koppel de kolom dop van de kraan . Reinig de kolom dop en de binnenkant van de kolom onder toepassing van wetenschappelijke reinigingsdoekjes . Plaats de kolom cap . Vul het bufferreservoir met buffervloeistof . Bevestig een spuitcilinder aan de kraan en open het. De spuit een kleine hoeveelheid buffer te trekken door de buis en in de spuit . Sluit de kraan en breng deze opnieuw aan de kolom top. Open de kraan en controleer op lekkages .
6

Laat de kolom van 0,02 ml per minuut voor enkele dagen, totdat de ferritine band nadert het einde van de kolom. Verzamel alle filtratie gel die uit wordt gepompt in de maatcilinder .