Methoden voor een Gist Drie Hybrid System

replicatie van de chromosomen , messenger RNA processing , vertaling van eiwitten , en cruciale beslissingen in de vroege stadia van ontwikkeling hangt af van de interactie van DNA , RNA en eiwitten . Deze interacties zijn de fundamentele biologische processen van genexpressie en eiwitsynthese . Wetenschappers gebruiken vaak Saccharomyces cerevisiae , dezelfde soort gist gebruikt in bakken en brouwen , de genen die voor specifieke proteïnen en interacties tussen eiwitten en andere moleculen te analyseren . De gist drie - hybride systeem is een van de drie varianten van de gist twee - hybride systeem worden gebruikt om deze interacties te bestuderen . De twee - hybride systeem

twee - hybride methode wordt gebruikt om eiwit - eiwit interacties te detecteren door te kijken naar de expressie van een reportergen . Veel eiwitten ten minste twee domeinen , of afzonderlijke structurele en functionele eenheden . GAL4 , een eiwit dat in Saccharomyces cerevisiae , een DNA bindend domein ( DBD ) en een activeringsdomein (AD ) . Bij deze werkwijze wordt een hybride eiwit gefuseerd aan de DBD en een tweede met de AD . Geen reportergen wordt uitgedrukt door de fusie van slechts een van de hybriden . Sinds de GAL4 reporter gen alleen tot expressie wanneer beide hybriden aanwezig zijn , wordt eiwit-eiwit interacties aangegeven .
De drie - Hybrid
Systeem

De drie - hybride methode identificeert een reportergen om de interactie van eiwitten te detecteren met RNA . De eerste hybride eiwit bestaat uit een DBD direct gefuseerd aan een RNA bindend domein . De tweede omvat de AD van GAL4 transcriptiefactor gebonden aan een RNA bindend eiwit . De RNA-bindende domeinen te communiceren met een hybride molecuul van RNA dat de twee hybride eiwitten bindt aan een complex te vormen . Vorming van het complex leidt tot de expressie van het GAL4 reportergen . Aangezien de verslaggever gen alleen wordt ingeschakeld door de vorming van de drie - hybride complex , haar aanwezigheid geeft de interactie van RNA en eiwitten .
De One- Hybrid
Systeem

een hybride methode wordt gebruikt om de interactie van eiwit detecteren met DNA . Een een - hybride systeem combineert een enkel eiwit , die de AD direct links naar de DBD . In plaats van het identificeren van een reportergen , zoekt deze methode voor een specifiek eiwit dat een doelsequentie DNA moet erkennen . De aanwezigheid van het specifieke eiwit geeft de interactie van eiwitten met DNA .
De One-Two Hybrid System

De een-twee hybride methode wordt gebruikt om eiwit - studie eiwit en eiwit - DNA -interacties tegelijk . Op basis van nieuwe giststammen , telt deze methode GAL4 reportergen eiwit - eiwit interacties en p53 consensus eiwit - DNA-interactie te identificeren identificeren . De methode is naar verwachting aanzienlijk toenemen de precisie van experimentele resultaten door het verminderen van het optreden van valse positieven verkregen in andere hybride systemen .